Тромбоглобулин бета: метод определения

Реактивы и оборудование

• Лунки микропланшета, покрытые антителами к β-ТГ.
• Калибратор/калибраторы.
• Ферментный конъюгат (кроличьи или козьи антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена).
• Буфер для образцов.
• Промывочный буфер.
• Раствор хромогена/субстрата (хромоген — тетраметилбензидин, субстрат — перекись водорода).
• Стоп-реагент.
• Оборудование для выполнения ELISA (вошер, ридер для планшетов и др.).

Дистрибьютор диагностического набора реагентов — ЗАО «Биохиммак».

Образцы крови для исследования

Кровь берут утром натощак (не менее чем через 8 ч после последнего приема пищи), в спокойном состоянии пациента, поэтому перед венепункцией ему рекомендуется отдых в течение 20-30 мин. Кровь набирают в специальные пробирки со стабилизатором CTAD (натрия цитрат, аденозин, теофиллин и дипиридамол). Чтобы избежать влияния вакуума и турбулентности на образец крови, ряд авторов рекомендуют открыть пробирку для устранения вакуума, наложить жгут лишь для поиска вены, пунктировать вену иглой, удалить первые 2 мл крови и только после этого собрать необходимый объем крови самотеком в пробирку. Из средней части пробирки отбирают У3 объема супернатанта для повторного центрифугирования в тех же условиях и получения бестромбоцитной плазмы, которая и используется для исследования. Все эти меры предназначены для того, чтобы избежать активации тромбоцитов на преаналитическом этапе, а также исключить попадание в исследуемый образец обломков клеток

Техника выполнения

Последовательность действий врача-лаборанта при определении уровня β-ТГ должна строго соответствовать инструкции к набору реагентов. Калибраторы рекомендуется исследовать в дублирующих определениях и использовать новую калибровочную кривую для каждой серии диагностического набора. Реагенты, входящие в состав набора, и планшет перед анализом должны иметь комнатную температуру.

Оценка результатов исследования

Концентрация β-ТГ у здоровых лиц не более 80 мкг/л, или 10-50 МЕ/мл. В некоторых лабораториях верхняя граница нормальных значений может быть иной; рекомендуется сформировать контрольную группу и самостоятельно определить диапазон нормальных значений.

Уровень β-ТГ может также изменяться при тромбоцитозах и тромбоцитопениях.

Интерпретация результатов исследования

β-ТГ — один из наиболее чувствительных маркеров активации тромбоцитов, может использоваться в оценке тромбофилических состояний наряду с другими маркерами активации свертывания. Уровень β-ТГ повышается при стимуляции тромбоцитов in vivo и in vitro коллагеном, АДФ, иммунными комплексами и другими веществами, способными вызывать агрегацию. Низкие значения уровня β-ТГ могут служить вспомогательным диагностическим критерием дефицита тромбоцитарных α-гранул. При тромбоцитопениях и тромбоцитозах уровень этого вещества следует оценивать с учетом числа тромбоцитов.

Причины ошибок

• Несоблюдение температурного режима хранения реагентов.
• Отсутствие или неэффективность системы внутреннего контроля качества.
• Недостаточное центрифугирование образцов обусловливает ложное завышение уровня (3-ТГ за счет наличия в образцах плазмы клеток.
• Высокий уровень липидов.
• Результаты исследования завышаются при почечной недостаточности.
• Конденсация влаги внутри лунок (для предупреждения возникновения конденсата не следует вскрывать пакет до тех пор, пока он не прогреется до комнатной температуры).

Другие аналитические технологии Определение уровня β-ТГ основано на учете взаимодействия антигена и антитела, поэтому для его количественного учета пригодны и другие технологии, позволяющие выявить компоненты иммунного взаимодействия (фермент, радионуклид, флюоресцентный краситель и др.).