Тест с ядом гадюки Рассела

Одним из первых, кто изучил влияние яда гадюки на коагуляцию, был британский исследователь Robert Macfarlane. В нашей стране приоритет в изучении механизмов отравления и разработке диагностических методов, основанных на применении ядов пресмыкающихся, принадлежит профессорам З.С. Баркагану и Л.П. Цывкиной. Именно в Алтайской лаборатории патологии гемостаза были разработаны лебетоксовый, эхитоксовый тесты и многие другие подобные методики. Было установлено, что механизмы действия ядов различных видов гадюки и гюрзы близки, однако использование лебеток-сового теста во многих ситуациях является более предпочтительным, поскольку яд Vipera Lebetina turanica в качестве реагента более стабилен, чем его аналоги.

В мировой диагностической практике наиболее широкое распространение получил диагностический метод с использованием яда гадюки Рассела (DRVV). Поскольку коагулаза из этого яда способна избирательно активировать коагуляционный фактор X, определение времени свертывания с использованием указанного токсина позволяет получить информацию об эффективности образования протромбиназного комплекса. Тест является фосфолипид-зависимым, поэтому его весьма широко применяют для обнаружения ВА.

Принцип метода

Яд гадюки Рассела способен даже в небольших количествах обусловить свертывание крови за счет активации коагуляционного фактора X. Принцип метода основан на оценке скорости образования сгустка фибрина после смешивания БТП, реагента, содержащего яд гадюки Рассела, и кальция хлорида.

Реактивы и оборудование

• Реагент, содержащий яд гадюки Рассела.
• Раствор кальция хлорида (0,025 М).
• Коагулометр (при отсутствии коагулометра — водяная баня и секундомер).

Образцы крови для исследования

Для выполнения теста используют БТП. Поскольку тест фосфолипид-зависимый, важны корректные режим и время проведения центрифугирования. Увеличение оборотов центрифугирования образца крови более 2500 g вызывает разрушение клеток крови, поэтому для эффективного удаления тромбоцитов целесообразно использовать двойное центрифугирование образцов (подробнее см. приложение 3).

Техника выполнения

В кювете коагулометра смешивают 0,1 мл исследуемой плазмы и 0,1 мл яда гадюки Рассела. Далее смесь инкубируют в течение 2 мин при температуре +37 °С. После инкубации в кювету добавляют 0,1 мл кальция хлорида, имеющего температуру +37 °С, в тот же момент включают таймер коагулометра и регистрируют время коагуляции.

Оценка результатов исследования Поскольку время коагуляции БТП зависит от активности ядового реагента, оценивают время свертывания не только исследуемой плазмы, но и контрольной нормальной БТП. Для обнаружения действия ингибиторов волчаночного типа используют такое разведение реагента, которое бы обусловливало коагуляцию нормальной плазмы в диапазоне 35-50 с.

Интерпретация результатов исследования Наиболее часто этот тест применяют для обнаружения ВА. При обнаружении нарушения времени свертывания для формирования суждения о причине удлинения времени коагуляции целесообразно использовать подтверждающие тесты и тесты смешивания.

Как и многие другие коагуляционные методики, специфичность этого теста ограничена. Удлинение времени свертывания наблюдается у больных с АФС, гипо-, дис- и афибрино-генемиями, на фоне применения антикоагулянтов и в ряде других нарушений.

Причины ошибок

• Неправильная дозировка цитрата при заборе венозной крови.
• Попадание в исследуемую кровь гепарина из венозного катетера.
• Гемолиз.
• Отсутствие или неэффективность системы внутреннего контроля качества.

Другие аналитические технологии

Способностью активировать фактор Стюарта—Прауэр обладает яд гюрзы, гадюки обыкновенной и некоторые другие коагулазы. Перечисленные реагенты обладают разной чувствительностью к действию ингибиторов коагуляции и стабильностью при хранении.