Активность антитромбина

Ген, ответственный за синтез антитромбина, локализован на длинном плече хромосомы 1 в положении q23-q25.1. Основной его функцией является инактивация ферментных факторов свертывания: тромбина, Ха, IХа и др. Определение активности антитромбина используют для лабораторной диагностики тромбофилического состояния, обусловленного дефицитом или аномалией этого физиологического антикоагулянта, а также для контроля лечения ДВС-синдрома.

В настоящее время для определения активности антитромбина широкое распространение получили методики, основанные на использовании различных пептидных хромогенных субстратов, специфичных к тромбину. В качестве примера в данном разделе монографии представлен один из таких методов, разработка и клиническая апробация которого были задачами диссертационной работы автора настоящей монографии. Пептидный субстрат тромбина, используемый в этом методе, был разработан группой авторов.

Принцип метода

Определение активности антитромбина основано на оценке его способности ингибировать тромбин в присутствии гепарина. В такой тест-системе скорость гидролиза хромогенного субстрата, специфичного к тромбину, зависит от его остаточной активности.

Для вычисления активности антитромбина необходим образец плазмы с известной активностью этого антикоагулянта. Чем больше активность антитромбина, тем менее выражено окрашивание в исследуемой пробе.

Интерпретация результатов исследования

Врожденный дефицит антитромбина обусловливает склонность к тромбозам, которые развиваются тем раньше, чем ниже его активность в крови. Принято различать два типа этого тромбофилического состояния. При I типе нарушен синтез антитромбина, вследствие чего снижается его функциональная активность и концейтрация, определяемая иммунологическими методами. При II типе происходит синтез аномальных молекул этого серпина, поэтому его функциональная активность снижена, тогда как уровень антигена остается нормальным.

При II типе дефицита различают варианты. Субтип IIа обусловлен молекулярными аномалиями тромбинсвязывающего домена, а субтип IIb — гепаринсвязывающего. Следует отметить, что наследственный дефицит антитромбина встречается довольно редко. Гораздо чаще отмечают приобретенные нарушения вследствие повышенного потребления (ДВС-синдром) или недостаточности синтеза антитромбина (болезни печени), а также других состояний.

При интерпретации результатов гепарин-кофакторных методик, основанных на инактивации тромбина, следует помнить о том, что кроме антитромбина такие методики учитывают активность кофактора гепарина II.

Причины ошибок

• Ошибки преаналитического этапа исследования, в т. ч. неправильная дозировка цитрата при заборе венозной крови.
• Неточное значение активности антитромбина в калибраторе.

Другие аналитические технологии

Кроме представленного способа и ряда аналогичных методик, в настоящее время разработаны другие лабораторные технологии детекции антитромбина: коагуляционный, иммунологический и амидолитический методы на основе анти-Ха-активности.

Инактивация тромбина происходит путем образования бимолекулярного комплекса, без гепарина антитромбин демонстрирует медленную (прогрессивную) инактивацию, а при наличии гепарина — быструю. С учетом этой биохимической особенности разработаны варианты коагуляционных и амидолитических методик, способных дифференцированно определять гепарин-кофакторную и прогрессивную активность антитромбина. Однако в повседневной диагностической практике целесообразно применять гепарин-кофакторные методы, основанные на применении хромогенных субстратов, поскольку такие способы обладают высокой надежностью и хорошей воспроизводимостью.